Поговорим о Taq-Man зондах, а именно о таком его элементе как гаситель (Quencher). Что это такое, каким образом он тушит флуорофору при этом находясь так далеко от него, как далеко он может располагаться от флуорофоры, какие гасители бывают? На эти другие вопросы мы постараемся получить ответы.

Как известно, при распаде зонда (т.е. в результате 5’-экзонуклеазной активности полимеразы во время ПЦР) происходит высвобождение флуорофоры, грубо говоря, из-под гнёта гасителя (см рис). В свободной форме флуорофора при поглощении определенной длины волны света переходит в возбужденное состояние. Флуорофора не может находиться в таком состоянии долго, в результате чего высвобождает фотон с меньшей длиной волны, происходит флуоресценция. Высвободив энергию, флуорофора обратно возвращается в основное состояние, т.е. в состояние покоя, когда молекула обладает минимальной энергией.

Гаситель фактически выполняет роль успокоительного для флуорофоры или в данном случае репóртера (ударение на «о», не путать с репортёром). Конечно, поглощённая энергия, по закону сохранения энергии, не может просто так исчезнуть, поэтому гаситель преобразует её немного в другие формы, которые мы обязательно затронем, но чуточку позднее. Существует несколько механизмов, объясняющих принцип тушения флуоресценции. Рассмотрим основные из них.